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提高BAC,Fosmid文库拷贝数,您只差了一支诱导剂

作者:admin信息来源:达科为日期:2018年03月26日打印字体:  
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首先安利一下Epicentre的专利技术——CopyControl™克隆系统,能够让您共享单拷贝和高拷贝的优点。CopyControl™克隆:首先以单拷贝形式生长,单拷贝可以确保插入稳定及成功克隆编码基因序列;在需要的时候,通过诱导液诱导成高拷贝克隆,以便下游应用所需。这一系统可以用来构建PCR克隆,对于BAC,Fosmid文库等大型质粒格外有用。

CopyControl™克隆系统有两个重要成分,相辅相成,缺一不可:

1.CopyControl™ pCC1和pCC2载体

pCC1和pCC2载体含有两个复制起始位点:单拷贝的大肠杆菌F-因子复制子和诱导型的高拷贝oriV。其中OriV的启动,需要trfA基因产物,由CopyControl™的另一个重要成分——TransforMax™ EPI300 E.coli菌株提供。

图1 pCC1载体图谱

2.TransforMax™ EPI300 E.coli

这是一种工程菌株,含有受诱导启动子控制的trfA基因,在诱导的条件下可以提供启动oriV所需要的trfA基因产物。 

图2 TransforMax™ EPI300 E.coli菌株基因型

 

CopyControl™克隆诱导步骤



图3 CopyControl™克隆流程

 

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