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细胞分选-染色-扩增——IBA集多种应用于一身

作者:admin信息来源:达科为日期:2018年06月08日打印字体:  
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小伙伴们是否对目前使用的细胞分选试剂盒不尽满意呢?阳选试剂盒能满足高纯度,是不是担心带着磁珠的细胞会对后续细胞培养产生影响呢?阴选试剂盒虽然保证了细胞的真实性,但最后的分选纯度能满足您实验的需求吗?别担心,这些问题IBA厂家早已替您想到了。IBA专利的Strep-tag®技术能帮助您在实现高纯度的同时,保留细胞的真实性,让分选出的细胞不带任何标记。在介绍IBA牛牛的产品之前,小达君可能先要跟您说道说道Streptamer® 技术和Fab-TACS技术。更有免费试用装来袭哦~ ~ ~


STREPTAMER® 技术

Streptamer® 技术是一个能满足科研工作者们研究真实的、不被修饰的细胞的强有力工具,借助它能获得可靠的、可重复的实验结果。Streptamer® 涵盖了从细胞分选、细胞扩增、到细胞染色的一系列完整细胞研究产品线。事实上,Streptamer® 的这种可逆机制是依赖于IBA专利的Strep-tag®技术,从而经过多重阳性分选,可获得用于后期扩增或染色的目的细胞。

Streptamer® 原理:

与Strep-tag® 偶联的低亲和力的Fab片段或MHC分子能够结合到目的细胞群上。因此,为了分离出目的细胞,以及后续的细胞扩增及染色,必须提高Fab片段或MHC分子与目的细胞的亲和力。因此,将多个Strep-tag®片段结合到链霉亲和素的衍生物Strep- Tactin® 多聚体上。进而实现了Fab片段或MHC分子与目的细胞的高亲和力结合。

偶联上磁珠的Strep-Tactin® 可用于细胞分选,不带标记Strep-Tactin® 用于细胞扩增实验,偶联上APC或PE荧光素的Strep-Tactin® 可用于细胞染色或流式分选。

一旦加入低浓度的生物素(Vitamin H),生物素能与Strep-tag® 竞争性地结合到Strep- Tactin® 上,从而使Strep-Tactin® 多聚体与Strep-tag®解离,失去Strep-Tactin® 多聚体的Fab/MHC片段由于与细胞亲和力降低随后也会从目标细胞上脱落。最终分离出不带任何标记的细胞,可用于后续的扩增实验,或用于细胞染色。

图. Streptamer® 原理 (A)多聚体与目的细胞的结合; (B)分选出目的细胞后,通过加入生物素来移除Strep-Tactin®; (C)Fab或MHC-I片段从目的细胞上解离。

Streptamer® 核心优点:

❯ 细胞分选,扩增,染色实验中不残留任何试剂在细胞上

❯ 避免细胞上留下非特异性信号物或刺激物

❯ 通过多重阳选,可分离出比例甚低的目的细胞

❯ 可适时终止刺激

Streptamer® 应用:

基于FAB STREPTAMERS® 对T细胞进行磁性分选

Fab片段能特异性识别细胞表面的CD抗原分子。Twin-Strep-tag® 通过与Strep-Tactin® 结合后,用于目的细胞的分选和染色。对于细胞分选,还需要StrepMan磁铁(cat.no 6-5650-065)。一旦加入生物素,生物素能与Strep-tag® 竞争性的结合到Strep-Tactin® 上,从而使Strep-Tactin® 多聚体从复合物上脱落,失去Strep-Tactin® 多聚体的Fab片段由于与细胞亲和力较低随后也会从目标细胞上脱落。

Fab-Streptamer®主要由以下两部分组成:

❯ 低亲和力的Fab段:Fab段融合到Twin-Strep-tag® (Fab-Strep)

❯  Strep-Tactin® 多聚体:偶联上磁珠或荧光素(PE/APC)

基于MHC I STREPTAMERS® 对抗原特异性T细胞进行磁性分选


抗原特异性CD8+ T细胞与荧光标记的MHC I Streptamers® (荧光标记的Strep-Tactin® 同低亲和力MHC I-Streps多聚体的复合物)共染,可经流式细胞仪检测并筛选,随后通过生物素去除标签,从而维持了细胞的真实性。这些无标签的功能性细胞可放心用于后续下游实验。

 

MHC I Streptamers® 由以下两部分组成:

❯ MHC I-Strep:一个MHC I分子上融合有Twin-Strep- tag® 和一个特异性的抗原肽

❯ Strep-Tactin® 多聚体:偶联有一种荧光素标签(PE/APC)或与磁珠结合

Fab-TACS:

不含磁珠的免疫亲和层析细胞分选技术


IBA新出的以亲和层析技术为基础、不含磁珠的细胞分选技术(Fab-TACS)依赖于其独有的Strep-tag®/Strep-Tactin® 系统。Fab-TACS使用基于CD特异性的Fab片段的免疫亲和层析技术,可逆的捕获和释放目的细胞。Fab-TACS技术不使用磁珠,直接从全血中分选目的细胞,分出的目的细胞不带有任何标记。

Fab-TACS重力柱填充了包被有Strep-Tactin® 多聚体的细胞级琼脂糖基质,偶联上Strep- tag的Fab片段(Fab-Streps)特异性的结合到琼脂糖基质上。它能直接从全血、血沉棕黄层或其他单细胞组织悬液中高得率、高纯度的分选出目的细胞,操作便捷。更重要的是,无需额外购买其他分选装置。

FAB-TACS核心优点:

❯ 高纯度、高得率

❯ 直接从全血中分选,无需离心

❯ 目的细胞不带任何标记




细胞刺激&扩增(CD3/CD28)

大量功能性T细胞的体外培养对于基础研究和治疗应用都至关重要。Streptamers® 应用于T细胞扩增是目前T细胞扩增术中一项较新颖的技术。该技术的核心在于:将抗CD3和抗CD28的Fab-Streps结合到Strep-Tactin® 多聚体上,使它们形成可溶性的蛋白复合物。

CD3/CD28 Streptamers® 扩增试剂盒组分:

❯ 可溶性的蛋白复合物:抗CD3和CD28的Fab-Streps结合到Strep-Tactin® 多聚体上形成

❯ 可彻底移除的试剂:通过加入生物素进行移除

核心优点:

❯ 可彻底移除的试剂

❯ 在任意时间点移除刺激

❯ 可自行调控CD3 : CD28 比例

❯ 无磁极与磁珠的作用

❯ 价格实惠

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